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PCR實(shí)驗室為什么要求嚴(yán)格分區(qū)

2022-05-10 09:47:17

PCR實(shí)驗室為什么要求嚴(yán)格分區(qū)

  PCR實(shí)驗室常見的三個區(qū)域是指:

  1.試劑配制區(qū):PCR反應(yīng)系統(tǒng)配制區(qū)。

  2.標(biāo)本處理區(qū):包括擴(kuò)增模板的制備,即我們經(jīng)常提取DNA的地方;

  3.PCR擴(kuò)增及產(chǎn)品分析區(qū):PCR擴(kuò)增區(qū),也是擴(kuò)增產(chǎn)品進(jìn)行凝膠電泳分析的區(qū)域。

  此外,如果PCR擴(kuò)增區(qū)與產(chǎn)品分析區(qū)再次分離,則為四區(qū)隔離。

  四區(qū)隔離的主要目的是防止每個PCR區(qū)域之間的氣溶膠流動——最好的方法是將每個區(qū)域分開一棟建筑,這絕對是最好的隔離措施,但操作絕對不現(xiàn)實(shí),因此有一種方法可以為不同區(qū)域設(shè)置正負(fù)壓:

  試劑配制區(qū)(一區(qū)):最干凈的區(qū)域,保持微正壓,使外界空氣無法進(jìn)入隔離污染源。陰性模板應(yīng)加入PCR管并蓋,嚴(yán)禁在該區(qū)域打開。存放帶DNA模板的離心管;

  DNA模板添加區(qū)(二區(qū)):保持微負(fù)壓,保證內(nèi)部空氣不泄漏,避免陽性模板氣溶膠污染外部環(huán)境。

  擴(kuò)增及PCR產(chǎn)品分析區(qū)(三區(qū)):保持微負(fù)壓,防止內(nèi)部空氣泄漏,避免擴(kuò)增產(chǎn)品氣溶膠污染外部環(huán)境。

  操作時遵循一區(qū)→二區(qū)→三區(qū)單向,不可逆轉(zhuǎn)。

  對于用于科研的PCR實(shí)驗室,如果不能滿足三區(qū)嚴(yán)格隔離的要求,至少應(yīng)隔離兩區(qū):正壓區(qū)和負(fù)壓區(qū)。正壓區(qū)實(shí)施一區(qū)功能,負(fù)壓區(qū)實(shí)施二區(qū)、三區(qū)功能。

  最忌諱、最可怕的是在正壓區(qū)實(shí)施三區(qū)功能。關(guān)鍵是PCR實(shí)驗室不同區(qū)域之間的空氣是否相互循環(huán)。

  如果有問題,我們的實(shí)驗室沒有正負(fù)壓區(qū)分,或者全負(fù)壓,全正壓怎么辦?然后我們的建議是:不要害怕麻煩,找一個遠(yuǎn)離三個區(qū)域的實(shí)驗室(通常打開PCR擴(kuò)展產(chǎn)品的蓋子區(qū)域,如電泳區(qū))作為PCRI區(qū)域,可以節(jié)省更多的后續(xù)麻煩。

  由于PCR三區(qū)隔離的目的是阻斷氣溶膠的交流,請注意以下細(xì)節(jié),思考?xì)馊苣z來自哪里:

  1.各區(qū)域應(yīng)配備專用移液器,不得交叉混用。

  2.各區(qū)域應(yīng)配備專用移液器吸頭,不得交叉混用。

  3.如果條件允許,在PCRII區(qū)工作后,需要更換實(shí)驗服、一次性鞋套、帽子、手套。

  4.在PCRI區(qū)域。PCRI區(qū)備濾芯吸頭。

  以上就是關(guān)于PCR實(shí)驗室要求嚴(yán)格分區(qū)的相關(guān)介紹,希望能幫助大家。

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