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PCR實驗室的分區(qū)及各區(qū)的功能

2021-12-14 10:50:18

PCR實驗室的分區(qū)及各區(qū)的功能

  PCR實驗室有哪些分區(qū)?PCR實驗室的各個分區(qū)的功能是什么?PCR實驗室原則上分成四個區(qū):試劑準備區(qū)、樣品制備區(qū)、擴增區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū)。每個獨立實驗區(qū)設(shè)置有緩沖區(qū),同時各區(qū)通過氣壓調(diào)節(jié),使整個PCR實驗過程中試劑和標本免受氣溶膠的污染并降低擴增產(chǎn)物對人員和環(huán)境的污染。

一、PCR實驗室的四個分區(qū)

  1、試劑準備區(qū)。此區(qū)主要是進行試劑的制備,分裝和主反應(yīng)混合液的制備。試劑盒用于樣品制作的材料應(yīng)直接運送至該區(qū)域。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內(nèi),并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的試劑。試劑準備區(qū)主要設(shè)備有天平、冰箱、離心機、加樣器、振蕩器等。對于,試劑準備區(qū)對氣流壓力的控制并沒有嚴格要求,通常在+10Pa。

  2、樣品制備區(qū)。此區(qū)主要進行樣品的保存,核酸提取,貯存及期入至擴增反應(yīng)管和測定DNA的合成。樣品制備區(qū)主要設(shè)備有冰箱、生物安全柜、離心機、加樣器、振蕩器等。樣品制備區(qū)的壓力梯度要求為:相對于鄰近區(qū)域為正壓,以避免從鄰近區(qū)進入本區(qū)的氣溶膠污染, 一般為+10Pa。

  3、擴增區(qū)。此區(qū)主要進行DNA的擴增。另外,已制備的DNA模板的加入和主反應(yīng)混合液(來自試劑準備區(qū))制備成反應(yīng)混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進行。擴增區(qū)主要設(shè)備有:擴增儀、冰箱、離心機、加樣器等。擴增區(qū)的壓力梯度要求為:相對于鄰近區(qū)域為負壓,為避免氣溶從本區(qū)漏出,一般為-25Pa。

  4、擴增產(chǎn)物分析區(qū)。此區(qū)主要進行擴增產(chǎn)物的測定。擴增產(chǎn)物分析區(qū)主要設(shè)備有酶標儀、洗板機、加樣器和水浴箱等。擴增產(chǎn)物分析區(qū)的壓力梯度的要求為:相對于鄰近區(qū)域為負壓,一般為-25Pa,以避免擴增產(chǎn)物從本區(qū)擴散至其它區(qū)域。

二、PCR實驗室防護消毒

  1、實驗室空氣消毒:實驗室每次檢測完畢后,需要進行空間消毒,清除實驗室殘留的核酸。

  2、工作臺面消毒:每天實驗后使用消毒液進行臺面、地面消毒。包括垃圾桶及垃圾袋都需要噴灑專用消毒液,確保病毒被殺滅。

  3、安全柜消毒:每天實驗完成后,對生物安全柜進行擦拭消毒。

  4、轉(zhuǎn)運容器消毒:轉(zhuǎn)運及存放標本的容器,使用前后用消毒劑噴灑消毒。

  5、塑料或有機玻璃材質(zhì)消毒:使用過氧乙酸或過氧化氫噴霧(噴淋)消毒,或擦拭消毒。

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